【核心結(jié)論】

等溫PCR儀是一種在恒定溫度下完成核酸擴增與熒光實時檢測的分子檢測設(shè)備，它擺脫了傳統(tǒng)PCR反復(fù)升降溫的復(fù)雜熱循環(huán)模式，將檢測時間從1.5-2小時縮短至30分鐘以內(nèi)。優(yōu)云譜YP-R16系列等溫PCR儀采用LED光源+SiPMT檢測器光學(xué)系統(tǒng)，具備單拷貝級靈敏度和10個數(shù)量級動態(tài)范圍，配合7英寸觸摸屏獨立運行、藍牙遠程操控等智能化設(shè)計，將操作門檻降至最低。本文從工作原理、操作流程到維護保養(yǎng)，為您呈現(xiàn)一份完整的等溫PCR儀使用科普指南。

一、等溫PCR儀是什么？——從原理到優(yōu)勢

1.1 什么是等溫PCR？

PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是體外擴增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。傳統(tǒng)PCR通過反復(fù)升降溫（變性95℃→退火55-65℃→延伸72℃）完成擴增循環(huán)，每個循環(huán)約需1-2分鐘，重復(fù)30-40個循環(huán)，總耗時1.5-2小時。

等溫PCR則采用具有鏈置換功能的聚合酶，在單一恒定溫度（通常60-65℃）下同時完成引物退火和鏈延伸，無需任何溫度變化即可實現(xiàn)核酸的指數(shù)擴增。將等溫擴增技術(shù)與實時熒光檢測技術(shù)結(jié)合，便構(gòu)成了等溫PCR儀——擴增與檢測同步進行，反應(yīng)結(jié)束即出結(jié)果。

1.2 等溫PCR儀的核心優(yōu)勢

1.3 等溫PCR儀能檢測什么？

等溫PCR儀可對病毒、細菌、真菌等微生物的核酸進行快速定性定量檢測，廣泛應(yīng)用于：

病原體檢測：流感病毒、腸道病毒、呼吸道病原體等

動物疫病檢測：非洲豬瘟、口蹄疫等

食品安全檢測：食源性致病菌、肉制品摻假、轉(zhuǎn)基因成分

基因表達分析：mRNA表達量測定、信號通路研究

水體監(jiān)測：飲用水源病原微生物檢測

二、檢測前準(zhǔn)備

2.1 環(huán)境要求

2.2 儀器開機與預(yù)熱

YP-R16-2 / YP-R16-4（PC軟件操作）：

連接電源線，按下電源開關(guān)

打開配套PC軟件，等待儀器與軟件建立通信連接

建議預(yù)熱10分鐘，使光源和傳感器達到穩(wěn)定工作溫度

YP-R16-6（觸摸屏獨立運行）：

連接電源線，按下電源開關(guān)

等待系統(tǒng)啟動（約30秒），進入Android主界面

點擊屏幕自檢功能，確認各通道狀態(tài)正常

預(yù)熱10分鐘，確保檢測基線穩(wěn)定

2.3 試劑與耗材準(zhǔn)備

試劑準(zhǔn)備：檢查等溫擴增試劑盒是否在有效期內(nèi)，嚴(yán)禁使用過期試劑。試劑從冷藏取出后需在室溫平衡15-20分鐘，使用前渦旋混勻并短暫離心。

耗材準(zhǔn)備：使用0.1mL透明8排管或0.1mL透明單管，確保管壁光滑無劃痕。推薦使用無DNase/RNase認證的耗材，避免核酸降解。

樣本準(zhǔn)備：待測樣本核酸提取完成后，按試劑盒說明書進行梯度稀釋（如需要）。建議設(shè)置陽性對照、陰性對照和內(nèi)參對照，確保結(jié)果可靠。

三、標(biāo)準(zhǔn)操作流程

3.1 操作流程（YP-R16-2 / YP-R16-4，PC軟件操作）

第一步：新建實驗

打開PC軟件，點擊『新建實驗』，輸入實驗名稱、操作者、日期等基本信息；選擇檢測通道（FAM/VIC/SYBR Green等）及對應(yīng)染料。

第二步：設(shè)置反應(yīng)參數(shù)

輸入恒溫擴增溫度（通常60-65℃，具體按試劑盒說明書）和反應(yīng)時間（一般30分鐘）；設(shè)置熒光采集頻率（建議每30秒采集一次）；可選擇是否開啟熔解曲線分析功能（用于驗證擴增產(chǎn)物特異性）。

第三步：加樣與放管

將PCR反應(yīng)體系分裝至0.1mL透明8排管或單管（樣本體積10-50μL）；蓋緊管蓋，檢查無漏液；將8排管/單管放入儀器樣本槽，確保緊貼加熱塊底部。

第四步：啟動運行

點擊『開始運行』，儀器自動進入恒溫擴增程序，實時擴增曲線開始繪制。運行過程中勿打開儀器蓋，避免溫控波動和光學(xué)干擾。

第五步：結(jié)果判讀

實驗結(jié)束后，軟件自動計算各樣本出峰時間或Ct值；陽性/陰性結(jié)果自動判定，擴增曲線和原始數(shù)據(jù)可導(dǎo)出保存。

3.2 操作流程（YP-R16-6，觸摸屏獨立運行）

第一步：新建實驗

在7英寸觸摸屏主界面點擊『新建實驗』，選擇實驗類型（定性檢測/定量分析）；輸入樣本編號和檢測項目信息。

第二步：設(shè)置反應(yīng)參數(shù)

通過觸摸屏設(shè)置擴增溫度和反應(yīng)時間；選擇熒光通道（FAM/VIC/SYBR Green等），系統(tǒng)自動匹配對應(yīng)的激發(fā)/發(fā)射波長。

第三步：加樣與放管

按前述方法完成加樣，將8排管/單管放入樣本槽。

第四步：啟動運行

點擊屏幕『開始運行』按鈕，實時擴增曲線在屏幕動態(tài)顯示。

第五步：結(jié)果判讀

運行結(jié)束后，系統(tǒng)自動判讀結(jié)果，陽性/陰性/無效結(jié)果在屏幕清晰標(biāo)示；支持生成PDF格式檢測報告，通過USB導(dǎo)出或WiFi打印。

3.3 藍牙連接操作（YP-R16-4專屬功能）

YP-R16-4支持藍牙無線連接，特別適合在生物安全柜內(nèi)操作：

將儀器放置于生物安全柜內(nèi)合適位置

開啟儀器藍牙功能，與外部電腦配對連接

在安全柜外通過PC軟件完成實驗設(shè)置和實時監(jiān)控

全程無需USB線纜穿過安全柜窗口，保持安全柜密封完整性

3.4 操作注意事項

加樣規(guī)范：使用帶濾芯移液槍頭，避免交叉污染；樣本和試劑加樣時避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會干擾熒光信號采集。

管蓋密封：確保8排管或單管蓋緊，防止反應(yīng)體系蒸發(fā)導(dǎo)致結(jié)果偏差。

避免光干擾：運行過程中避免強光直射儀器光學(xué)窗口，以免影響熒光信號采集。

生物安全：處理感染性樣本時，加樣和開蓋操作需在生物安全柜內(nèi)完成，廢液和耗材按生物廢棄物規(guī)范處理。

四、數(shù)據(jù)分析與結(jié)果解讀

4.1 擴增曲線解讀

等溫PCR儀的輸出結(jié)果是實時擴增曲線——橫坐標(biāo)為時間，縱坐標(biāo)為熒光強度。

陽性樣本：擴增曲線呈典型的S型或指數(shù)上升形態(tài)，出峰時間與樣本中靶標(biāo)核酸濃度成反比（濃度越高，出峰越早）。

陰性樣本：擴增曲線平坦，無指數(shù)上升，熒光信號始終處于基線水平。

無效結(jié)果：陽性對照無信號或陰性對照出現(xiàn)信號，說明實驗體系存在問題，需重新檢測。

4.2 結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)

4.3 數(shù)據(jù)導(dǎo)出方式

優(yōu)云譜YP-R16系列等溫PCR儀支持以下數(shù)據(jù)導(dǎo)出方式：

原始數(shù)據(jù)導(dǎo)出：以表格形式導(dǎo)出原始檢測結(jié)果、Ct值、熒光信號值等

擴增曲線導(dǎo)出：以圖片格式（PNG/JPG）導(dǎo)出擴增曲線圖

檢測報告生成：YP-R16-6支持PDF格式報告一鍵導(dǎo)出

USB存儲導(dǎo)出：連接USB存儲設(shè)備，直接導(dǎo)出Excel或PDF文件

五、日常維護與保養(yǎng)

5.1 每次實驗后

5.2 每周維護

散熱孔清潔：檢查儀器背面和側(cè)面散熱孔是否積灰，用小毛刷或吸塵器清除灰塵

電源線檢查：檢查電源線插頭是否松動，USB/藍牙連接是否正常

時間校準(zhǔn)：檢查儀器系統(tǒng)時間/日期是否準(zhǔn)確（YP-R16-6在系統(tǒng)設(shè)置中校準(zhǔn)）

5.3 每月維護

5.4 長期停用保管

若儀器預(yù)計停用30天以上：

清潔樣本槽和光學(xué)窗口，確保無樣本殘留

取出所有耗材，關(guān)閉電源并斷開電源線

用防塵套覆蓋儀器，存放于溫度-20~55℃、濕度20%~80%的干燥環(huán)境

重新啟用前，先開機預(yù)熱15分鐘，運行一次空白程序檢查儀器狀態(tài)

六、常見故障排查與處理

七、型號選型快速指引

八、優(yōu)云譜品牌實力與服務(wù)體系

企業(yè)概況

山東優(yōu)云譜光電科技有限公司是專業(yè)科學(xué)儀器制造商，主營業(yè)務(wù)涵蓋研發(fā)、生產(chǎn)和銷售應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生態(tài)、食品快檢、水質(zhì)檢測、分子生物、實驗室前處理等領(lǐng)域的儀器設(shè)備。公司將光電技術(shù)與AI技術(shù)和云服務(wù)深度融合，為農(nóng)業(yè)、林業(yè)、科研、畜牧、氣象、水利、食藥、環(huán)境等領(lǐng)域提供綜合解決方案。

資質(zhì)認證

榮獲多項國家證書

通過ISO 9001質(zhì)量管理體系認證

獲得CNAS校準(zhǔn)證書

通過中國計量院校準(zhǔn)